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ELISA樣本組織勻漿處理

日期:2024-09-20 07:35
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摘要: ELISA樣本組織勻漿處理: 1、 采集組織,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,剔除附屬的結(jié)締組織,稱取組織塊。 2、 用移液管量取0.1M PBS或者用0.86%冷生理鹽水,勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天熱時操作要在冰水浴中進行,將盛有組織的小燒杯放入冰水中)。 3 、勻漿的方式有多種: a) 、手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進行勻漿,左手持勻漿...

ELISA樣本組織勻漿處理:

1、 采集組織,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,剔除附屬的結(jié)締組織,稱取組織塊。

2、 用移液管量取0.1M PBS或者用0.86%冷生理鹽水,勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天熱時操作要在冰水浴中進行,將盛有組織的小燒杯放入冰水中)。

3 、勻漿的方式有多種:

a) 、手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次(68分鐘),充分研碎,使組織勻漿化。

b)、 機器勻漿:用組織搗碎機1000015000r/min上下研磨制成10%組織勻漿,也可用內(nèi)切式組織勻漿機制備(勻漿時間10/次,間隙30秒,連續(xù)35次,在冰水中進行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。

c)、 超聲粉碎:用超聲粉碎機進行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎,也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用40安培,5/次,間隙10秒反復(fù)35次。

4、 將制備好的10%勻漿用離心機4℃,3000rpm離心15min,將離心好的勻漿小心收集上清,棄下面沉淀。

5、 取上清并分裝保存?zhèn)溆?,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。