人Ⅳ型膠原ELISA試劑盒操作要點(diǎn)：

1、為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本均設(shè)雙孔測(cè)定。每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

2、 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先用樣本稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)允箻颖痉显噭┖械臋z測(cè)范圍，zui后計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

3、 加樣：加樣時(shí)，請(qǐng)使用一次性的潔凈吸頭，避免交叉污染。加樣時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡，將樣本加于酶標(biāo)板孔底部，切勿沿孔壁加樣。一次加樣時(shí)間zui 好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4、 溫育：為防止樣本蒸發(fā)或污染，溫育過(guò)程中酶標(biāo)板必須覆上板貼，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中酶標(biāo)板應(yīng)避免處于干燥的狀態(tài)。溫育過(guò)程中應(yīng)隨時(shí)觀察溫箱溫度是否恒定于37℃，及時(shí)調(diào)整。溫育過(guò)程中，溫箱不易開(kāi)啟太多次，以免影響溫度平衡。

5、洗滌：洗滌過(guò)程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。

1）、 手工洗板方法：吸去（不可觸及孔壁和孔底）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液按200μL/孔注入孔內(nèi)，浸泡2分鐘。根據(jù)操作步驟中所述，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。

2）、 自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

4.6 顯色：為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液?？稍诩尤氲孜锶芤汉竺扛粢欢螘r(shí)間觀察一下顯se 情況以控制反應(yīng)時(shí)間（比如每隔10分鐘）。當(dāng)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品前3-4孔有明顯梯度藍(lán)色，后3-4孔顯色不明顯時(shí)，即可加入終止液終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立刻變?yōu)辄S色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。

7、 底物溶液應(yīng)為淺藍(lán)色或無(wú)色，如果顏色嚴(yán)重變深則必須棄用。底物溶液易受污染，請(qǐng)避光妥善保存。