1、培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長所需的某種因子

通常情況下，當(dāng)小伙伴購買細(xì)胞，并沒有按照ATCC或國內(nèi)細(xì)胞庫推薦的方法制備培養(yǎng)基，使用實(shí)驗(yàn)室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基，或直接購買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。

2、支原體、xi菌、真jun等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(青霉素和鏈霉素)，但如果無菌操作觀念不強(qiáng)，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細(xì)胞，可以丟棄污染細(xì)胞。當(dāng)然，丟棄并不是隨意的，扔進(jìn)垃圾桶。應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室生物**規(guī)定進(jìn)行。然后復(fù)蘇培養(yǎng)物，建議培養(yǎng)箱完全消du。如果不冷凍，而且這種細(xì)胞非常珍貴，常用的方法是yao物:xi菌污染加5-10倍的抗生su;真jun污染加抗真junyao物;支原體污染再加上抗支原體yao物，具體yao物可以咨詢，他們會更加專業(yè)。

3、許多細(xì)胞的生長依賴于密度。如果傳代后細(xì)胞密度過小，也會影響細(xì)胞生長。這段時間沒有什么特別好的，就是更換液體。如果細(xì)胞培養(yǎng)瓶為T75，則可以消化、離心、復(fù)蘇，然后接種到T25瓶中。

4、冷凍細(xì)胞中添加DMSO(二甲基亞砜)的量不正確，沒有逐漸梯度冷卻。下一次恢復(fù)后的細(xì)胞總是壞的。處理方法:按推薦的冷凍保存方法制備冷凍液。部分細(xì)胞適合10% DMSO，部分細(xì)胞適合5% DMSO;嚴(yán)格遵循漸變冷卻的原則，細(xì)胞恢復(fù)后迅速解凍。

5、換液間隔時間太長。一些小伙伴真的把細(xì)胞“佛”系生長。當(dāng)他們想到它的時候，才會換下液體，相信一個句子?！澳阋呀?jīng)是一個成熟的細(xì)胞了。你應(yīng)該學(xué)會養(yǎng)活自己，成長”。在這種情況下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中積累了大量的細(xì)胞代謝廢物，影響細(xì)胞活性。推薦:勤奮點(diǎn)！

6、細(xì)胞的“消化”時間不宜過長，減少對細(xì)胞的損傷;此外，EDTA一般添加到胰腺酶中，螯合鈣離子，影響細(xì)胞粘附。zhi療方法:控制細(xì)胞“消化”時間，盡量去除干凈的胰蛋白酶和EDTA。

PH值:細(xì)胞需要在一定的PH值下生長，這個小朋友知道。但是很多時候PH值是我們忽略的東西，這也是小秋今天想強(qiáng)調(diào)的一點(diǎn)。隨著使用時間的增加，我們使用的介質(zhì)可能會慢慢變成堿性!(當(dāng)然，它也可能變酸，但改變堿是常見的)。一般來說，過堿的培養(yǎng)基會影響細(xì)胞的生長。zhi療:簡單的方法就是更換新鮮的培養(yǎng)基!當(dāng)然，如果你有時間和條件，你可以調(diào)整介質(zhì)的pH值。