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氧化節(jié)桿菌操作步驟
日期：2024-09-20 07:44
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摘要：
氧化節(jié)桿菌操作步驟：
1. 事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃。
2. 從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管(100 μl)感受態(tài)菌，立即用手指加溫融化后插入冰上，冰浴5~10 min。
3. 加入5 μl 連接好的質(zhì)粒混合液(DNA含量不超過100 ng)，輕輕震蕩后放置冰上20 min。
4. 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2 min進行熱休克，然后迅速放回冰中，靜置3~5 min。
5. 在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500 μl LB培養(yǎng)基(不含抗ju...
氧化節(jié)桿菌操作步驟：
1. 事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃。
2. 從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管(100 μl)感受態(tài)菌，立即用手指加溫融化后插入冰上，冰浴5~10 min。
3. 加入5 μl 連接好的質(zhì)?；旌弦?DNA含量不超過100 ng)，輕輕震蕩后放置冰上20 min。
4. 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2 min進行熱休克，然后迅速放回冰中，靜置3~5 min。
5. 在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500 μl LB培養(yǎng)基(不含抗jun素)輕輕混勻，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1 h。
6. 在超凈工作臺中取上述轉(zhuǎn)化混合液100-300 μl，分別滴到含合適抗jun素的固體LB平板培養(yǎng)皿中，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
7. 如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話，滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
8. 在涂好的培養(yǎng)皿上做上標記，先放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30~60 min 直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后，再倒置過來放入37℃恒溫培養(yǎng)箱過夜。
9. 在被xi菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦干桌面，寫實驗報告。
10. 觀察平板上長出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。