實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：豬鏈球菌通用型(SS-U)定性PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P64200
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

人體BRCA－1基因甲基化檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

蛋白雜交封閉溶液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：100毫升

6-氯咪唑并[1,2-b]噠嗪 6-Chloroimidazo[1,2-b]pyridazine  6775-78-6 質(zhì)量規(guī)格：>98%

P1噬體效價檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細胞樣品細胞色素C氧化酶表達組織化學檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

鈣蛋白酶抑制劑II(進口) Calpain Inhibitor II(ALLM) 136632-32-1 質(zhì)量規(guī)格：≥95%,美國進口

冰凍切片β-半乳糖苷酶活性原位染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

P1噬體克隆DNA純化試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

N-去甲基洛哌丁胺-d3 N-Desmethyl Loperamide-d3 1189488-17-2 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CDK2蛋白共沉淀分析試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

 細胞DAP KINASE蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

蛋白電泳2倍樣品處理液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10毫升

硫酸鉍(>98%,BR) Bismuth (III) sulfate 7787-68-0 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

 細胞鈣ATP酶PMCA蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

氟離子（F-）標準溶液（500mg/L,溶劑：水）  Fluoride standard 16984-48-8 質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：水

6倍堿性凝膠DNA電泳上樣緩沖液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10毫升

豬鏈球菌通用型(SS-U)定性PCR檢測試劑盒ZNF474/ZFP106  鋅指蛋白474抗體 規(guī)格: 0.1ml

TSPAN3  四分子交聯(lián)體3抗體（四旋蛋白） 規(guī)格: 0.2ml

C17orf57  17號染色體開放閱讀框57抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rho C  RhoC抗體 規(guī)格: 0.1mlBTBD1/HCV NS5A transactivated protein 8  丙肝病毒NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2ml

CCDC92  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白92抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat anti-Bovine IgG whole serum  羊抗牛IgG抗清 規(guī)格: 1mlTransglutaminase  轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶1抗體 規(guī)格: 0.1ml

MyoD1/Myf3  肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlCadherin 9  鈣粘附蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2ml

EP3  前列素E受體3抗體 規(guī)格: 0.1mlCCDC75  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白75抗體 規(guī)格: 0.2ml

SBP1/Selenium Binding Protein 1  結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlCD83/HB15  CD83抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Cy7  Cy7標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-human IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

Tubulin-alpha  微管蛋白α抗體 Tubulin α 規(guī)格: 0.1mlCCDC37  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體 規(guī)格: 0.2ml

FMNL1  成蛋白相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlMFAP1  微原纖維膠原相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

ESM1  內(nèi)皮細胞特異性分子1抗體 規(guī)格: 0.1mlFerritin Light Chain  鐵蛋白輕鏈抗體 規(guī)格: 0.1ml

MMP9  基質(zhì)金屬蛋白酶9抗體 0.1mlC1orf129  1號染色體開放閱讀框129抗體 規(guī)格: 0.2ml

CYP11A1/P450SCC  細胞色素P450 11A1抗體 規(guī)格: 0.1mlCCDC148  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白148抗體 規(guī)格: 0.2ml

ATG8/GABARAPL2  G1氨基丁酸A型受體相似蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlSLC40A1/FPN1  細胞膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白FP1抗體 規(guī)格: 0.1ml