實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：枯草芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P64442
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見(jiàn)使用方法）。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法：
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）

 FSH-BETA蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：5次

松三糖單水；D-(+)-松三糖一水 Melezitose monohydrate 10030-67-8 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BC

活性炭(電鍍脫色專用,40-60目,from Nutshell) Activated charcoal 7440-44-0 質(zhì)量規(guī)格：電鍍脫色專用,40-60目,from Nutshell

四戊基碘化銨(>98.0%(T)) Tetraamylammonium Iodide 2498-20-6 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

環(huán)境傷寒沙門(mén)氏（Salmonella Typhi）定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)硫化氫檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

利谷?。?biāo)準(zhǔn)品）  Linuron 330-55-2 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

通用型胱氨酸（cystine）含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

2,6-二氯嘌呤 2,6-Dichloropurine 5451-40-1 質(zhì)量規(guī)格：>97%,原裝進(jìn)口

細(xì)胞長(zhǎng)鏈烯脂酰輔酶A水合酶（ENOYL COA HYDRATASE）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

溴酚藍(lán)（BROMPHENOL BLUE）溶液（100毫克/毫升） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10毫升

 細(xì)胞CASPASE-7蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

氟草胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Benfluralin 1861-40-1 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

鏈霉親和素 Streptavidin from Streptomyces avidinii 9013-20-1 質(zhì)量規(guī)格：>15Units/mg protein

鉭標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml) Tantalum standard 7440-25-7 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml

細(xì)內(nèi)比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

枯草芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒AKAP12/Gravin  絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體 規(guī)格: 0.1ml

ALAS1/ALAS-H  5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit anti-MG IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

MLLT11  髓系/或混合型白病11抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-SCNN1B(Thr615)  磷酸化上皮鈉通道β2抗體 規(guī)格: 0.1ml

RNF32  環(huán)指蛋白32抗體 規(guī)格: 0.2ml

PATZ1  轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MAZR抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-ICAM1(Tyr512)  磷酸化細(xì)胞間粘附分子1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Substance P Receptor/NK1R  P物質(zhì)受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

TRAF7  瘤壞死因子受體相關(guān)因子7抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Goat IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml

TEF4/TEA domain family member 2  轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF4抗體 規(guī)格: 0.2ml

IL-4I1  白細(xì)胞介素4誘導(dǎo)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

EBP50/SLC9A3R1  細(xì)胞骨架連接質(zhì)膜蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

ASTN2  星形肌動(dòng)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-BAP1(Ser592)  磷酸化易感基因1抗體(人) 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Syk (Tyr525/526)  磷酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體 規(guī)格: 0.1mlPIGA  紅細(xì)胞磷脂酰肌醇聚糖A抗體 規(guī)格: 0.2ml