相對定量分析方法  ：
2-ΔΔCt
前提：目標序列和內(nèi)參序列的擴增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
 1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標基因的CT值：
   ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
   ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
 2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值：
        ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
 3、計算表達水平比率：
                   2 –ΔΔCT=表達量的比值

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：RT-PCR試劑盒
貨號：FS-205641

使用方法:

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

具有下列特點：
1.根據(jù) 指標的保守序列設計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數(shù)量級，可以達到幾百拷貝/反應。
3.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 μL、20
μL、200 μL、1000 μL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的**離心管、吸頭（10 μL、200 μL、1000 μL）、**雙蒸水。

"20 μl ER-Tracker Red（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
250 μg Fluo-3 AM（鈣離子熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1 mg Fluo-3，五銨鹽 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1 mg Fura-2 AM（鈣離子熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
25 mg Fluorescein-5-maleimide Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1 mg Fura-2，五銨鹽 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1 mg Golgi-Tracker Red（高爾基體紅色熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
10 mg Hydroxystilbamidine  Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1 mg Indo-1 AM Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1 mg Indo-1，五銨鹽 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1 mg JC-1 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
5 mg JC-10 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
RT-PCR試劑盒 mg Lucigenin（光澤精） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
人 EGR2 基因全長ORF克隆
人 TCHP 基因全長ORF克隆
人 FSCN3 基因全長ORF克隆
人 CEP63 基因全長ORF克隆
人 FZR1 基因全長ORF克隆
人 GABRA3 基因全長ORF克隆
人 PPIL4 基因全長ORF克隆
人 ACBD5 基因全長ORF克隆
人 HSPBAP1 基因全長ORF克隆
人 PIGA 基因全長ORF克隆
人 RGS7 基因全長ORF克隆"

注意事項：
1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間，也可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。
3. 電泳檢測時，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶，影響實驗結(jié)果。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi)，以便擴增效率佳。
?5. 為了您的**和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作