產(chǎn)品名稱：結(jié)膜上皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格：5×105
貨號：BH-X019911
產(chǎn)品類型：原代細胞
單位：T25/瓶
提供細胞鑒定：提供**熒光鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度（℃）：37
運輸溫度（℃）：常溫
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學(xué)檢測。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學(xué)研究，作為實驗項目研究。
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產(chǎn)品名稱 |
結(jié)膜上皮細胞 |
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規(guī)格 |
5×105 |
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貨號 |
FS-X019911 |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
細胞處理方法：
以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度，細胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細技術(shù)指導(dǎo)，請及時電話或郵件聯(lián)系。
一．貼壁細胞
客戶接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。
顯微鏡觀察細胞，當(dāng)細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
1000rpm,5min離心，重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二．懸浮細胞
1. 接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。
3. 嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒）。
5. 1000rpm,5min離心，重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
酪蛋白瓊脂 250(g)
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基 250(g)
Columbia-MUG瓊脂培養(yǎng)基 100(g)
RVS肉湯 250(g)
嗜鹽選擇性瓊脂 250(g)
乳糖膽鹽培養(yǎng)基 250(g)
OGY瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
結(jié)膜上皮細胞膜聯(lián)蛋白A5(AnnexinA5)elisa檢測試劑盒英文名稱：AnnexinA5 ELISA Kit，英文縮寫：AnnexinA5，產(chǎn)品別名：膜聯(lián)蛋白A5(AnnexinA5)ELISA檢測試劑盒，膜聯(lián)蛋白A5(AnnexinA5)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
磷酸乙醇酸磷酸酶(PGP)elisa檢測試劑盒英文名稱：PGP ELISA Kit，英文縮寫：PGP，產(chǎn)品別名：磷酸乙醇酸磷酸酶(PGP)ELISA檢測試劑盒，磷酸乙醇酸磷酸酶(PGP)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
錨蛋白B(Ank-B)elisa檢測試劑盒英文名稱：Ank-B ELISA Kit，英文縮寫：Ank-B，產(chǎn)品別名：錨蛋白B(Ank-B)ELISA檢測試劑盒，錨蛋白B(Ank-B)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
類肌腱蛋白c(TNC)elisa檢測試劑盒英文名稱：TNC ELISA Kit，英文縮寫：TNC，產(chǎn)品別名：類肌腱蛋白c(TNC)ELISA檢測試劑盒，類肌腱蛋白c(TNC)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)elisa檢測試劑盒英文名稱：sPL-A2 ELISA Kit，英文縮寫：sPL-A2，產(chǎn)品別名：可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA檢測試劑盒，可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
人抗增殖核抗原抗體(PCNA)elisa檢測試劑盒英文名稱：PCNA ELISA Kit，英文縮寫：PCNA，產(chǎn)品別名：人抗增殖核抗原抗體(PCNA)ELISA檢測試劑盒，人抗增殖核抗原抗體(PCNA)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
人抗殺通透性增高蛋白抗體(BPI-Ab)elisa檢測試劑盒英文名稱：BPI-Ab ELISA Kit，英文縮寫：BPI-Ab，產(chǎn)品別名：人抗殺通透性增高蛋白抗體(BPI-Ab)ELISA檢測試劑盒，人抗殺通透性增高蛋白抗體(BPI-Ab)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)elisa檢測試劑盒英文名稱：EMA IgA ELISA Kit，英文縮寫：EMA IgA，產(chǎn)品別名：人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA檢測試劑盒，人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
人抗Sc1-70抗體(Sc1-70-Ab)elisa檢測試劑盒英文名稱：Sc1-70-Ab ELISA Kit，英文縮寫：Sc1-70-Ab，產(chǎn)品別名：人抗Sc1-70抗體(Sc1-70-Ab)ELISA檢測試劑盒，人抗Sc1-70抗體(Sc1-70-Ab)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
金屬硫蛋白2(MT-2)elisa檢測試劑盒英文名稱：MT-2 ELISA Kit，英文縮寫：MT-2，產(chǎn)品別名：金屬硫蛋白2(MT-2)ELISA檢測試劑盒，金屬硫蛋白2(MT-2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
堿性成纖維生長因子(bFGF)elisa檢測試劑盒英文名稱：bFGF ELISA Kit，英文縮寫：bFGF，產(chǎn)品別名：堿性成纖維生長因子(bFGF)ELISA檢測試劑盒，堿性成纖維生長因子(bFGF)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。