6）觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)

細(xì)胞處理方法：

以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度，細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo)，請(qǐng)及時(shí)電話或郵件聯(lián)系。

一．貼壁細(xì)胞

客戶接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。

產(chǎn)品名稱：DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基

英文名稱：DMEM/F12

貨號(hào)：BH-X019993

產(chǎn)品規(guī)格：500ml

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

二．懸浮細(xì)胞

1. 接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

種培養(yǎng)基    250(g)

沙氏瓊脂培養(yǎng)基    250(g)

強(qiáng)化梭鑒別培養(yǎng)基    250(g)

MFC培養(yǎng)基    250(g)

胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）    250(g)

胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂（TSA-YE）    250(g)

玫瑰紅鈉瓊脂    1000(g)

DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基Ⅳ型膠原(Ⅳ－C)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Ⅳ－C ELISA Kit，英文縮寫：Ⅳ－C，產(chǎn)品別名：Ⅳ型膠原(Ⅳ－C)ELISA檢測(cè)試劑盒，Ⅳ型膠原(Ⅳ－C)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

1,25二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3 ELISA Kit，英文縮寫：1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3，產(chǎn)品別名：1,25二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)ELISA檢測(cè)試劑盒，1,25二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

5羥色胺(5-HT)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：5-HT ELISA Kit，英文縮寫：5-HT，產(chǎn)品別名：5羥色胺(5-HT)ELISA檢測(cè)試劑盒，5羥色胺(5-HT)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

可溶性Endoglin(ENG/sCD105)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ENG/sCD105 ELISA Kit，英文縮寫：ENG/sCD105，產(chǎn)品別名：可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA檢測(cè)試劑盒，可溶性Endoglin(ENG/sCD105)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

白介素1α(IL-1α/IL-1F1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：IL-1α/IL-1F1 ELISA Kit，英文縮寫：IL-1α/IL-1F1，產(chǎn)品別名：白介素1α(IL-1α/IL-1F1)ELISA檢測(cè)試劑盒，白介素1α(IL-1α/IL-1F1)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

組織蛋白酶F(CTSF)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CTSF ELISA Kit，英文縮寫：CTSF，產(chǎn)品別名：組織蛋白酶F(CTSF)ELISA檢測(cè)試劑盒，組織蛋白酶F(CTSF)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：TRF ELISA Kit，英文縮寫：TRF，產(chǎn)品別名：轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)ELISA檢測(cè)試劑盒，轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

周期素依賴性激酶抑制因子3(CDKN3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CDKN3 ELISA Kit，英文縮寫：CDKN3，產(chǎn)品別名：周期素依賴性激酶抑制因子3(CDKN3)ELISA檢測(cè)試劑盒，周期素依賴性激酶抑制因子3(CDKN3)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

脂質(zhì)運(yùn)載蛋白9(LCN9)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：LCN9 ELISA Kit，英文縮寫：LCN9，產(chǎn)品別名：脂質(zhì)運(yùn)載蛋白9(LCN9)ELISA檢測(cè)試劑盒，脂質(zhì)運(yùn)載蛋白9(LCN9)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

整合素αD(ITGαD)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ITGαD ELISA Kit，英文縮寫：ITGαD，產(chǎn)品別名：整合素αD(ITGαD)ELISA檢測(cè)試劑盒，整合素αD(ITGαD)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

造血蛋白(HEMGN)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：HEMGN ELISA Kit，英文縮寫：HEMGN，產(chǎn)品別名：造血蛋白(HEMGN)ELISA檢測(cè)試劑盒，造血蛋白(HEMGN)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。