產(chǎn)品名稱：成纖維細(xì)胞添加劑
英文名稱：
貨號：BH-X020077
規(guī)格：5ml
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實驗項目研究。
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產(chǎn)品名稱 |
成纖維細(xì)胞添加劑 |
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規(guī)格 |
5ml |
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貨號 |
FS-X020077 |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
細(xì)胞處理方法：
以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時細(xì)胞密度，細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo)，請及時電話或郵件聯(lián)系。
一．貼壁細(xì)胞
客戶接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。
顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二．懸浮細(xì)胞
1. 接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。
3. 嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。
5. 1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
m HPC瓊脂 高營養(yǎng)培養(yǎng)基，用于水檢測中分離、計數(shù)異養(yǎng)或“富營養(yǎng)”的細(xì)500g
DMEM（高糖），液體 含4500ml/l葡萄糖，L-谷氨酰胺
不含丙酮酸鈉11965-092
胰蛋白示（Trytose） Oxoid500g
紫紅膽汁 (乳糖) 瓊脂 (CM0107) Oxoid
巰基醋酸鹽肉湯 (另一USP配方) (CM0391) Oxoid
彎曲瓊脂基礎(chǔ) (CM0689) Oxoid
堿性L-J培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250(g)
成纖維細(xì)胞添加劑血小板衍生生長因子B(PDGFB)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforPlateletDerivedGrowthFactorSubunitB(PDGFB) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(CEBPβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforCCAAT/EnhancerBindingProteinBeta(CEBPb) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
角蛋白8(KRT8)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforKeratin8(KRT8) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
衰老關(guān)鍵蛋白1(FBLN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforFibulin1(FBLN1) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
蛋白激酶Bβ(PKBβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforProteinKinaseBBeta(PKBb) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Penguin蛋白(PEN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforPenguin(PEN) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
腎上腺素能受體α1A(ADRα1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforAdrenergicReceptorAlpha1A(ADRa1A) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
球蛋白G(IgG)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforImmunoglobulinG(IgG) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Corin蛋白(CRN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforCorin(CRN) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
SynembrynB蛋白(SYNB)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforSynembrynB(SYNB) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)